试剂盒内容
| 编号 | 名称 | 规格 |
|---|
| 1 | 标记缓冲液(Labeling Buffer) | 3ml |
| 2 | 末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20) | 50μl |
| 3 | DIG-dUTP(×20) | 50μl |
| 4 | 封闭液(Blocking Reagent) | 10ml |
| 5 | 生物素化抗地高辛抗体(×100) | 50μl |
| 6 | SABC-AP(×100) | 50μl |
| 7 | Proteinase K(×200) | 125μl |
| 8 | BCIP/NBT 显色剂(×20) | 0.5ml |
| 9 | SABC稀释液 | 10ml |
| 10 | 阳性对照片 | 2张 |
需要自备的试剂
1. 多聚赖氨酸或APES(博士德公司有售)。
2. 0. 01M TBS(pH7.5)(配法:1L双蒸馏水中加入8.5克氯化钠,1.2克Tris 和0.45—0.5ml纯乙酸。)
3. 0.01M TBS,pH9.0-9.5(配法:1L双蒸馏水中加入8.5克氯化钠,1.2克Tris )。
4. 核固红—复染用。
5. 水溶性封片剂。
使用说明
操作步骤:
1. 样品处理
(1) 玻片预先用多聚赖氨酸或APES进行处理。
(2) 细胞涂片和冰冻切片：最重要的是及时固定。用4%多聚甲醛/0.01M PBS(pH7.0-7.6)室温下固定30—60分钟。PBS洗2分钟×2次。蒸馏水洗涤2分钟×2次。
(3) 组织：应及时固定。常规4%多聚甲醛/0.01M PBS(pH7.0-7.6)或10%中性缓冲福尔马林固定4小时以上，石蜡包埋。切片常规脱蜡入水9脱蜡务必干净)。
2. 标本片加0. 01M TBS(pH7.5)1: 200新鲜稀释Proteinase K 37℃消化1-15分钟, TBS洗2分钟×3次。(细胞涂片和冰冻切片一般不消化或仅消化10-60秒钟。新鲜石蜡切片消化5-10分钟。陈旧石蜡切片消化10-15分钟)。
3. 标本片加标记缓冲液(Labeling Buffer),20μι/片,以保持切片湿润。然后按每张切片取TdT和DIG-dUTP各1μι，加入18μι标记缓冲液中，混匀，甩去切片上多余液体后加混合的标记液，20μι/片。置样品于湿盒中，37℃标记2小时。
4. 0. 01M TBS(pH7.5)洗2分钟×3次。
5. 加封闭液50μι/片，室温30分钟，甩掉封闭液，不洗。
6. 用SABC稀释液1：100稀释生物素化抗地高辛抗体：(取1ml SABC稀释液加生物素化抗地高辛抗 体10μι)，混匀后50μι/片加至标本片上。置样品于湿盒中，37℃反应30-60分钟。0.01M TBS洗2分钟×3次。
7. 用SABC稀释液1：100稀释SABC-AP：取1ml SABC稀释液加SABC-AP 10μι，混匀后50μι/片加至切片。37℃反应60分钟。0.01M TBS洗5分钟×4次。
8. BCIP/NBT显色：BCIP/NBT (×20)按1：20的比例用0.01M TBS (pH9.0-9.5)稀释，混匀。显色液加至标本上。避光显色20-30分钟，若无背景出现则可继续显色。充分水洗。必要时可用核固红等复染。水溶性封片剂(博士德有售)封片，也可简单地用甘油封片。镜检。
注意事项
1. 试剂盒严格-20℃存放。
2. 初用时如试管底部无可见的试剂，在离心机离心 5 分钟，使试剂沉至管底。
3. 检测过程中切勿使样品干涸。
文献引用格式
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒-AP (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#MK1017)
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