产品名称
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒-FITC+POD
试剂盒内容
| 编号 | 名称 | 规格 |
|---|
| 1 | 标记缓冲液(Labeling Buffer) | 3ml |
| 2 | 末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20) | 50μl |
| 3 | DIG-dUTP(×20) | 50μl |
| 4 | 封闭液(Blocking Reagent) | 10ml |
| 5 | 生物素化抗地高辛抗体(×100) | 50μl |
| 6 | SABC-FITC(×100) | 50μl |
| 7 | SABC-POD(×100) | 50μl |
| 8 | Proteinase K(×200) | 125μl |
| 9 | SABC稀释液 | 10ml |
| 10 | 未染色阳性对照片 | 2张 |
需要自备的试剂
1. 多聚赖氨酸或APES(博士德公司有售)。
2. 0.01M TBS,pH7.5 (配法:1L 双蒸馏水中加入8.5 克氯化钠,1.2 克Tris 和0.45—0.5ml 纯乙酸)。
3. 水溶性封片剂或荧光衰减封片剂（博士德公司有售)。
4. DAPI染色液(货号AR1176，AR1177)。5. DAB 显色试剂盒(博士德公司有售)，也可自配显色剂。
使用说明
操作步骤
1. 样品处理
(1) 玻片预先用多聚赖氨酸或APES 进行处理。
(2) 细胞涂片和冰冻切片：最重要的是及时固定。用4%多聚甲醛/0.01M PBS(pH7.0—7.6)室温下固定30—60 分钟。0.01M PBS 洗2 分钟×2 次。蒸馏水洗涤2 分钟×2 次。
(3) 组织：有条件时应及时固定。常规4%多聚甲醛/0.01M PBS(pH7.0—7.6)或10%中性缓冲福尔马林固定4 小时以上，石蜡包埋。切片常规脱蜡入水（脱蜡务必干净）。
2. 标本片加0.01M TBS 1:200 新鲜稀释Proteinase K 37℃消化1—15 分钟,0.01M TBS 洗2 分钟×3次。(细胞涂片和冰冻切片一般不消化或消化10—60 秒钟。新鲜石蜡切片消化5-10 分钟。陈旧石蜡切片消化10-15 分钟)。
3. 标本片加标记缓冲液(Labeling Buffer) 20μι/片,以保持切片湿润。按每张切片取TdT和DIG-d-UTP 各1μι，加入18μι标记缓冲液中，混匀。甩去切片上多余液体后加标记液，20μι/片。置样品于湿盒中，37℃标记2 小时。
4. 0.01M TBS 洗2 分钟×3 次。
5. 加封闭液50μι/片，室温30 分钟，甩掉封闭液，不洗。
6. 用SABC稀释液1：100稀释生物素化抗地高辛抗体：（取1ml SABC稀释液加生物素化抗地高辛抗体10μι），混匀后50μι/片加至标本片上。置样品于湿盒中，37℃反应30 分钟。0.01M TBS洗2 分钟×3 次。
7. 用SABC稀释液1：100稀释 SABC-FITC/（SABC-POD）：取1ml SABC稀释液加 SABC-FITC/（SABC-POD）10μι，混匀后50μι/片加至切片。37℃反应30 分钟。0.01M TBS 洗5 分钟×4 次。
8.加SABC-FITC的在荧光显微镜下用蓝色光激发观察。
9.加SABC-POD的，可选用DAB 显色：取1ml 蒸馏水，分别加入DAB 试剂盒中A，B，C 试剂各一滴，混匀后加至标本片上，显色10-30 分钟左右。水洗。
10. 苏木素轻度复染。0.01M TBS 洗，蒸馏水洗。水溶性封片剂封片。
注意事项
1. 试剂盒严格-20℃存放。
2. 初用时如试管底部无可见的试剂，在离心机离心 5 分钟，使试剂沉至管底。
3. 检测过程中切勿使样品干涸。
文献引用格式
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒-FITC+POD (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#MK1019)
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